人重组IL-2的表达和纯化方法

1.引言

IL-2是一种重要的细胞因子，对T细胞的生长、增殖和分化发挥着重要的作用。重组IL-2的表达和纯化是研究其作用机制及其临床应用的前提，因此其标准化生产方法备受关注。

2.重组IL-2基因的构建和表达

2.1基因构建

以人IL-2为模板，利用PCR方法扩增得到人IL-2的cDNA序列，与表达载体pET-28a 进行连接，构建出重组IL-2基因。

2.2表达选择

重组IL-2的表达主要有大肠杆菌、哺乳动物细胞等。由于大肠杆菌生长快、易培养和价格低廉，因此我们选择大肠杆菌表达来表达和纯化重组IL-2。

2.3重组IL-2的表达

采用大肠杆菌表达，将重组IL-2基因重组大肠杆菌表达，在适当的诱导剂和生产条件下表达获得重组IL-2，并利用SDS-PAGE等方法对重组IL-2进行鉴定。

3.重组IL-2的纯化

3.1细胞破碎和离心

采用超声波处理法对表达后的培养皿进行破碎，细胞异物离心后，将上清液进行下一步纯化。

3.2亲和层析

将上清液经过Ni-NTA Spin腰豆层析柱进行初步纯化，收集到重组IL-2经纯化的洗脱液。

3.3透析

将洗脱液进行透析，利用透析柱使其在适当的缓冲液中进行透析，去除杂质、离子等杂质。

3.4离子交换层析

将透析后的样品进行Q-Sepharose Fast Flow层析来进行精细的纯化；根据吸附条件的差异可分离出纯度较高的重组IL-2。

4.结果与结论

本研究成功构建了重组IL-2表达载体，并利用大肠杆菌表达获得了重组IL-2，并利用层析技术得到了高效、高纯度的重组IL-2样品，为进一步研究其功能提供了基础条件。

5.参考文献

[1] Waldmann T A. The interleukin-2 receptor: a target for rational therapy[J]. Blood, 1985, 65(5): 1063-1072.

[2] 史佳. 重组人白细胞介素-2的表达和纯化[M].新疆：乌鲁木齐，2016.